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胰酶不能去除對(duì)原代細(xì)胞影響的原因

原代細(xì)胞消化時(shí)，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是沒(méi)有問(wèn)題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA，去除。EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細(xì)胞分離。但EDTA不能被血清中和，消化后要*清洗去除，否則細(xì)胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率，所以常二者合用。胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長(zhǎng)期保存。商品化胰酶溶液需要用干冰運(yùn)輸，在運(yùn)輸過(guò)...

腫瘤細(xì)胞在藥物心臟毒性篩選中的應(yīng)用

腫瘤細(xì)胞和誘導(dǎo)型人多能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化的心肌細(xì)胞相似,具有相同的形態(tài)結(jié)構(gòu),且隨著培養(yǎng)時(shí)間的推移,功能性K+、Na+、Ca2+通道密度逐漸增加、心肌特異性基因ANF、α-MHC、MLC-2a的表達(dá)量增加,具有相似的動(dòng)作電位時(shí)程和收縮性等特點(diǎn),相當(dāng)于幼稚型心肌細(xì)胞。將它們應(yīng)用于已知作用藥物的心臟毒性篩選,檢測(cè)心肌細(xì)胞離子通道、動(dòng)作電位、心臟損傷標(biāo)志物、收縮功能的變化,獲得與臨床相似的結(jié)果。因此,建立人胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)型人多能干細(xì)胞誘導(dǎo)分化心肌細(xì)胞的體外評(píng)價(jià)模型,大大減少了藥物的時(shí)間...

5-羥色胺可調(diào)控造血腫瘤細(xì)胞移植

腫瘤細(xì)胞是一群能自我更新并分化為各種成熟血細(xì)胞的多能干細(xì)胞。基于其重建血液系統(tǒng)的能力，造血干細(xì)胞移植已成功用于治療白血病等惡性血液疾病。如何體外誘導(dǎo)和擴(kuò)增足夠數(shù)量且有功能的HSPCs，是臨床上惡性血液疾病治療的瓶頸，也是基礎(chǔ)科學(xué)研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)之一。其目前尚未成功的根本原因在于人們對(duì)HSPCs產(chǎn)生和擴(kuò)增的調(diào)控機(jī)制認(rèn)識(shí)仍不全面。因此，應(yīng)用模式動(dòng)物深入和系統(tǒng)地研究體內(nèi)HSPCs產(chǎn)生和擴(kuò)增過(guò)程及其調(diào)控機(jī)制，將對(duì)體外誘導(dǎo)并擴(kuò)增有功能的HSPCs具有十分重要的指導(dǎo)意義。中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研...

原代細(xì)胞直接修復(fù)細(xì)胞促使損傷創(chuàng)面愈合

原代細(xì)胞臨床上燒傷常常并發(fā)感染、休克、膿毒血癥、MODS(多器官功能障礙綜合征)等嚴(yán)重并發(fā)癥，具有很高的病死率。但是，目前臨床上常用的清創(chuàng)換藥、抗感染、補(bǔ)液、生長(zhǎng)因子促進(jìn)愈合、自身或者異體移植等治療方法卻不能取得*理想可靠的效果，而臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞展現(xiàn)出的強(qiáng)大修復(fù)能力,為燒傷治療開(kāi)辟了嶄新的路徑。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞是從人臍帶華通膠中分離出來(lái)的一種基質(zhì)細(xì)胞，其具有增殖率高、易于分離、便于檢測(cè)、不違背倫理道德和無(wú)免疫原性或低免疫原性，植入體內(nèi)有良好的組織相容性，無(wú)明顯排斥反應(yīng)，生物...

細(xì)胞株分化過(guò)渡狀態(tài)

研究人員利用細(xì)胞株分析技術(shù)發(fā)現(xiàn)Lgr5+小腸干細(xì)胞來(lái)源的祖細(xì)胞實(shí)際上包含了兩個(gè)不同的細(xì)胞群體，進(jìn)一步揭示了小腸干細(xì)胞分化過(guò)程的zui早期步驟。位于每個(gè)小腸腸窩底部的LGR5+小腸干細(xì)胞是維持干細(xì)胞和小腸上皮細(xì)胞自我更新的動(dòng)力，之前有研究發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞在分化形成具有成熟功能的終末細(xì)胞之前會(huì)經(jīng)歷短暫擴(kuò)充祖細(xì)胞（transit-amplifyingprogenitors）階段，這些小腸雙潛能祖細(xì)胞會(huì)單向分化形成具有吸收功能的細(xì)胞或具有分泌功能的細(xì)胞。之前還有研究發(fā)現(xiàn)在血液中造血祖細(xì)胞會(huì)...

原代細(xì)胞培養(yǎng)中血清為什么不是越多越好

血清是原代細(xì)胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，具有極為重要的功能。1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類(lèi)、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在原代細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，...

細(xì)胞系轉(zhuǎn)染樣品的處理步驟

1.細(xì)胞系將處理好的蓋玻片放在12孔板底部如果細(xì)胞貼壁不牢（如HEK293）或者是半貼壁細(xì)胞（如PC12），可以用細(xì)胞刮子將鼠尾膠原均勻地涂抹在玻片上包被。也可使用多聚賴氨酸，但是效果不如鼠尾膠原。事實(shí)上大部分貼壁的細(xì)胞都不用進(jìn)行包被。如果在操作中發(fā)現(xiàn)細(xì)胞脫片嚴(yán)重，則可考慮進(jìn)行包被來(lái)提高細(xì)胞貼壁能力。2.將與培養(yǎng)基混勻后的細(xì)胞懸液加入孔中這一步混勻非常重要，如果不勻，一般細(xì)胞都會(huì)聚集在玻片中央?yún)^(qū)域，會(huì)對(duì)形態(tài)觀察產(chǎn)生不利影響。分細(xì)胞的時(shí)候要注意進(jìn)行形態(tài)觀察的時(shí)候應(yīng)該將細(xì)胞分得相...

詳解腫瘤細(xì)胞因子的分類(lèi)特征

腫瘤細(xì)胞之間的信息傳遞可以通過(guò)細(xì)胞表面的受體與配體的相互作用，也可以通過(guò)細(xì)胞產(chǎn)生的可溶性分子。參與白細(xì)胞間相互作用的可溶性分子稱(chēng)為白細(xì)胞介素（interleukin，IL），簡(jiǎn)稱(chēng)白介素，通常將其中單核細(xì)胞產(chǎn)生的分子稱(chēng)為單核因子（monokine），將淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的分子稱(chēng)為淋巴因子（Lymphokine）。后來(lái)發(fā)現(xiàn)，這些分子不僅白細(xì)胞可產(chǎn)生，其他細(xì)胞如內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和角朊細(xì)胞也能產(chǎn)生，便將這些分子統(tǒng)稱(chēng)為細(xì)胞因子（cytokine，Ck）。因而細(xì)胞因子是由細(xì)胞產(chǎn)生的小分子可...