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如何降低腫瘤細胞分離中的污染

在分離單核腫瘤細胞時，我們就必須采取措施來降低血小板污染。在制備單核細胞懸液時，Stemcell給出了如下的建議：1.從Ficoll密度梯度離心中取出單核細胞層時，避免吸到富含血小板的血漿。2.緩慢離心，洗滌單核細胞(120×g，10分鐘，常溫)。3.小心棄上清，其中含有血小板，用新鮮的緩沖液重懸細胞(記得換個干凈的吸頭)。4.重復上面2步，總共洗滌3次。另外，Stemcell還給出了一些降低血小板污染的其他建議：?使用大口徑的針來抽取血液樣本?輕輕地抽血，如果使用注射器推桿...

腫瘤細胞的分離和純化

腫瘤細胞的分離和純化:1.取2～3公斤重的家兔，耳緣靜脈注射10ml空氣處死動物或注射2ml(含130mg)戊巴比妥麻醉動物。仰臥固定，剪開胸壁。以下過程注意無菌操作。小心從環狀軟骨下方剪下氣管，分離心臟和血管，取出肺，剪去脂肪和結締組織。用無菌紗布小心擦凈肺表面，稱重。2.分離肺泡巨噬細胞：用夾子夾住氣管，使肺懸空。向氣管中注射40ml無菌的冷生理鹽水，讓生理鹽水進入全部肺泡。用鑷子提起氣管，從夾子下面剪斷氣管，將肺中的液體倒入離心管中。再用同樣方法，用40ml無菌冷生理鹽...

如何選擇原代細胞常用的熒光素 ？

.原代細胞認為熒光信號之間的干擾，會增加信號檢測背景①熒光信號強細胞群體的SD比熒光信號弱的細胞群體大；②多色分析時，一種熒光素（如FITC）的光會漏入相鄰的熒光素（如PE）的檢測器。漏入的光越多，需要補償的越多，對分辨率的影響就越大。尤其是弱表達的信號。6.盡量減少熒光信號之間的干擾①檢測的顏色越多，面臨的熒光信號之間的干擾越多；②選擇試劑組合時盡可能降低熒光發射波長之間的重疊。.儀器配置的差異，多色分析不可能全選“zui亮”的熒光素，但對于特定的一款儀器，可以根據熒光的強...

詳解腫瘤細胞侵襲實驗步驟

腫瘤細胞侵襲能力檢測在腫瘤學（遷移、侵襲）和免疫學（遷移、趨化）中是常規實驗。1.侵襲是細胞遷移的一種。細胞遷移分三種類型：趨觸、趨化和侵襲。2.腫瘤細胞的侵襲性是腫瘤相關信號通路、藥物治療、靶向治療、致癌/抑癌基因等腫瘤學研究的一個重要指標。3.免疫細胞具有趨化性，例如粒細胞、巨噬細胞、單核細胞對CCL、CXCL類因子的趨化性，免疫細胞異常（如過度趨化）通常會引起一些炎癥類疾病如風濕、關節炎、牛皮蘚、動脈粥樣化等。具體操作以配合24孔板的8μMPET膜Millicell懸掛...

腫瘤細胞轉染實驗小貼士

腫瘤細胞轉染目前已經成為研究和控制真核細胞基因表達的重要手段。本文整理了一些關于轉染實驗前的準備工作及一些實驗過程中的小貼士，希望這些信息能夠幫助各位科研君們做好轉染實驗及提高實驗效率。①從健康細胞開始Ⅰ轉染實驗前，細胞解凍后傳代3–4次。這使得細胞從解凍過程中恢復過來，并恢復正常的生長速度。Ⅱ僅使用活性90%的細胞——使用臺盼藍染色可輕松測定細胞活性。Ⅲ定期傳代細胞，切勿讓細胞長到匯合狀態或過度生長。如果讓細胞長到匯合狀態，可能會改變細胞的生長速度以及形態。a.請在匯合率達...

原代細胞有絲分裂的實驗方法

(一)原代細胞試驗原理細胞有絲分裂指數(mitoticindex，MI)是指屬于分裂期的細胞占總細胞數的百分率．用于表示細胞增殖旺盛的程度，也可用于檢測藥物對細胞增殖能力的影響。用蓋玻片培養法培養細胞，做固定和染色后，鏡下觀察和計數1000個細胞中處于分裂期的細胞數并計算MI。(二)材料1．待檢材料(藥物)。2．細胞培養成層的貼壁細胞。3．試劑甲醇、3％吉姆薩染液。4．器材CO2培養箱、倒置顯微鏡、蓋玻片(2．2cm×2．2cm，需預先清洗和滅菌處理)、塑料培養皿(3．5cm...

細胞系器分配決定著肝細胞命運

在細胞系一項新的研究中，來自美國洛克菲勒大學的研究人員發現這種關鍵性的決定取決于作為微小器官樣結構的細胞器是否在分裂中的干細胞內正確地分配。“為了讓身體的組織正確地發育和自我維持，干細胞的自我更新和分化必需保持平衡。我們的實驗提示著細胞器（在這項研究中，指的是過氧物酶體）的定位和分配在控制這種微妙平衡中發揮著一種意想不到的作用。”不對稱分裂作為皮膚的外部，表皮給身體提供一種保護性屏障，而干細胞位于它的內部深處。在發育期間，干細胞發生不對稱分裂，產生兩個子細胞：一個子細胞保持自...

原代細胞融合實驗

原代細胞實驗原理細胞融合(Cellfusion)，即在自然條件下或用人工方法(生物的、物理的、化學的)使兩個或兩個以上的細胞合并形成一個細胞的過程。人工誘導的細胞融合，在六十年代作為一門新興技術而發展起來。由于它不僅能產生同種細胞融合，也能產生種間細胞的融合，因此細胞融合技術目前被廣泛應用于細胞生物學和醫學研究的各個領域。細胞融合的誘導物種類很多．常用的主要有滅活的仙臺病毒(Sendaivirus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和電脈沖。目前應用z...