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保持腫瘤細胞的活性狀態的工作原理是什么

保持腫瘤細胞的活性狀態是每一個細胞研究者都在仔細做的事情，因為細胞的活力和狀態是不斷變化的，而非一成不變的。在細胞體外培養的過程中，離開機體保護的細胞是很脆弱的，在陌生的生長環境下即便是培養條件的輕微改變，也可能對細胞產生無法預估的影響。在原代細胞培養過程中，即使保持培養條件*一致，在傳代過程中，細胞的存活質量也是逐漸下降的。以人臍靜脈內皮細胞（HUVEC細胞）為例，HUVEC細胞是研究內皮細胞功能的經典體外細胞模型。在心血管疾病的研究中，主要用于研究內皮細胞功能改變或損傷后...

細胞系轉染與分子載體新技術與產品的介紹

選擇哪種細胞系轉染方法通常需要綜合多方面的考慮因素，比如靶向的細胞類型，傳遞的分子種類，以及轉染效率哪家強等等諸如此類的問題。我們認為，“zui吸引人的方法就是zui簡單的方法，即化學轉染方法”。大體來說，傳統的化學和物理轉染方法就能滿足大部分研究人員的需要，因為一般的科研采用的都是易于轉染和培養的細胞系。但是這些方法常常是有毒的，而且當面對原代細胞、干細胞或其他難轉染的細胞類型的時候，化學方法的轉染效率就較低了。相對來說病毒載體方法對范圍較廣的細胞類型，轉染效率就相當高了，...

重組原代細胞因子的狀態

重組原代細胞因子要求：1.真實性：重組蛋白產品一致經過N末端氨基酸序列分析；必要時應用SDS-PAGE,RP-HPLC和質譜(MS)檢測其真實性。2.純度：應用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析產品純度。3.生物活性：進行相應的體外(invitro)或體內(invivo)活性檢測。4.蛋白含量：通過紫外光譜分析，SDS-PAGE電泳檢測；必要時應用HPLC定量標準蛋白溶液。5.內毒素：kineticLAL法檢測內毒素。6.微生物：重組蛋白在裝瓶之前都經過濾除菌處理。重組...

分享活腫瘤細胞表面受體配體結合檢測的新技術

Tag-lite是SNAP-Tag與HTRF技術相結合，用來進行活腫瘤細胞表面受體分析的一種技術。SNAP和CLIP是小的融合標簽蛋白，可特異地與底物通過芐甲基不可逆共價結合，其底物分別為芐甲基鳥嘌呤（BG）和芐甲基胞嘧啶（BC）。由于底物可與各種染料形成衍生物，這樣，通過共價反應，染料就標記到SANP或CLIP上了。SNAP或CLIP可以非常容易地融合到蛋白質的N端或C端，所以我們可以構建SNAP或CLIP與目標蛋白的表達載體。質粒轉染、融合蛋白表達后，加入標記了熒光染料的...

實驗鼠有助攻克細胞株療法難題

研究人員介紹，人類胚胎細胞株可分化成人體內的各種細胞及組織，所以對治療人類重大疾病有巨大潛力。但目前干細胞療法發展面臨的一個主要瓶頸就是移植后的免疫排斥。新研究的成功關鍵在于開發出一種“人源化”實驗鼠。徐洋表示，雖然小鼠和人的免疫系統有很多相似處，但它們也有很多不同的地方，所以小鼠模型中獲得的關于防止免疫排斥的策略在人的臨床試驗中大多以失敗告終。為解決這個問題，他們將人胚胸腺及胚肝中的造血干細胞移植到免疫缺陷小鼠體內，培育出“人源化”實驗鼠，它們會有效排斥異體人類胚胎干細胞分...

判斷原代細胞活性是否正確工作的原理

原代細胞活性是判斷體外培養細胞在某些條件下是否能正常生長的重要指標,如藥物處理、放射性或紫外線照射、培養條件變化等。目前常用的方法有很多,如有臺盼藍染色法、克隆(集落)形成法、H放射性同位素摻入法、MTT法等。本文總結了一些常用的細胞活性檢測方法的原理、特點，并對比了各自的優缺點。一、染色計數法1.化學染色法染色計數法是細胞培養中檢查細胞死活zui常用的方法，直接利用死細胞和活細胞對染料的不同親和力，檢查細胞活性，能在光學顯微鏡下觀察到染色結果。可分為兩類：死細胞著色法和活細...

詳解原代細胞凍存的步驟

（1）選擇處于對數生長期的原代細胞，在凍存前一天換液。將多個培養瓶中的細胞培養液去掉，用0.25%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養液。用吸管吸取培養液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)。（2）去上清液，加入含20%小牛血清的*培養基，于4℃預冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為5×106～1×107/mL之間。（凍存培...

胰酶不能去除對原代細胞影響的原因

原代細胞消化時，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是沒有問題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA，去除。EDTA是一種化學螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細胞分離。但EDTA不能被血清中和，消化后要*清洗去除，否則細胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯合使用可提高消化效率，所以常二者合用。胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時間延長，胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長期保存。商品化胰酶溶液需要用干冰運輸，在運輸過...