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原代細胞融合實驗步驟

實驗方法原理原代細胞融合的誘導物種類很多．常用的主要有滅活的仙臺病毒(Sendaivirus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和電脈沖。目前應用zui廣泛的是聚乙二醇，因為它易得、簡便，且融合效果穩定。PEG的促融機制尚不*清楚，它可能引起細胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團發生結構重排。實驗材料雞紅細胞試劑、試劑盒PEGHanks液儀器、耗材顯微鏡離心機水浴箱離心管試管載玻璃片蓋玻片實驗步驟1.取新鮮雞血以0.85%生理鹽水制成10%的懸液。2.稱取0.5...

原代細胞培養目的與用途

1、原代細胞科學研究：藥物研究開發與基礎研究藥物研究與開發(1)新藥篩選：如化學合成藥物藥效研究、中藥有效成分篩選與鑒定等。(2)疫苗研究與開發：如病毒性疫苗的研究與開發（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、腫瘤疫苗(多肽疫苗)等。(3)基因工程藥物研究與開發：如干擾素研究與開發，細胞生長因子研究與開發等。(4)細胞工程藥物研究與開發：生物活性多肽研究與開發，人參皂甙、紫杉醇等生物活性成分研究與開發。(5)單克隆抗體制備：包括診斷用單克隆抗體，治療用單克隆抗體。基礎研究(1)藥物作...

腫瘤細胞染色體數目異常的原因

腫瘤細胞分裂是指細胞分裂為兩個相同副本的過程。普通人的一生中要經歷無數次的這一過程。為了生成兩個*相同的副本，細胞必須地分離它們的染色體，這一事件依賴于稱之為動粒（kinetochore）的專門結構將染色體雙向附著到紡錘體微管上。在細胞分裂的早期階段，動粒結合紡錘體微管會發生許多的錯誤。正常的細胞能夠有效地糾正這些錯誤，確保染色體正確分離。而癌細胞通常不會糾正這些錯誤，使得子細胞染色體數目異常，從而幫助這些癌細胞抵抗化療。在這項新研究中LilianKabeche博士和Duan...

原代細胞培養有哪些經驗和教訓

原代細胞嚴格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干。不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套。有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測。水浴鍋很臟，生化培養箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，勤換（滅菌水加進去）。的是同一時間就你一個人在用細胞房在養細胞。別怕浪費。槍頭什么的只要有可能污染就換，如果用酒精燈就什么都稍微烤一下，別直接放到火上，離一段距離。動作要既輕柔又有力。動作太重會有一堆一堆的氣泡，動作太輕就吹不下來。。。剛開始的時候吹細胞...

原代細胞的穩定性

除非原代細胞產品說明書上另有特別說明，否則所有PeproTech蛋白產品都為凍干粉形式，在室溫下也能保持很好的穩定性。但是，我們推薦凍干產品保存于-20℃。大多數凍干產品經溶解和稀釋后，可短時間保存于4℃；若要進行較長時間保存，我們建議稀釋到工作液濃度并加入一定的carrierprotein（如0.1%BSA），然后分裝保存于-20℃。請注意每一次凍融過程都會造成蛋白的部分變性，應避免反復凍融。重組細胞因子的交叉活性除了少數例外，大多數人類細胞因子對小鼠細胞都有活性。許多小鼠...

原代細胞凍存是保存的主要方法之一

原代細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于一196~C液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內...

原代細胞的透過性

原代細胞的選擇透過性：這種膜可以讓水分子自由通過，細胞要選擇吸收的離子和小分子（如：氨基酸、葡萄糖）也可以通過，而其它的離子、小分子和大分子（如：信使RNA、蛋白質、核酸、蔗糖）則不能通過。膜蛋白：指細胞內各種膜結構中蛋白質成分。載體蛋白：膜結構中與物質運輸有關的一種跨膜蛋白質，細胞膜中的載體蛋白在協助擴散和主動運輸中都有特異性。細胞質：在細胞膜以內、細胞核以外的原生質，叫做細胞質。細胞質主要包括細胞質基質和細胞器。細胞質基質：細胞質內呈液態的部分是基質。是細胞進行新陳代謝的...

細胞系自動化篩選技術

zui常用的細胞系方法是檢測96孔細胞培養板中蛋白的濃度；另外一個方法是讓細胞在軟瓊脂上生長形成集落，然后利用原位免疫沉淀技術獲得高產細胞。近年來，發展起來的高通量自動化篩選技術也被受關注。為實現克隆的高表達，在有些情況下外源基因擴增，比如以CHO用作宿主細胞；有些情況則不需要，比如雜交瘤細胞。為了實現外源基因的擴增，將細胞在高濃度的擴增標記（比如dhfr）抑制劑的壓力下生長。細胞存活需要擴增標記。高濃度的抑制劑能夠殺死除擁有多個擴增標記基因以外的絕大多數細胞。在標記基因擴增...