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原代細(xì)胞生長的檢查方法

原代細(xì)胞是zui簡單的檢測細(xì)胞生長的方法。計數(shù)細(xì)胞一般利用臺盼藍(lán)(錐蟲藍(lán)染色，臺盼藍(lán)(錐蟲藍(lán))不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不著色。而死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增高，可使染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)而使細(xì)胞著色。因此，鏡下未染色細(xì)胞認(rèn)為是活細(xì)胞，而染色細(xì)胞認(rèn)為是死亡細(xì)胞。經(jīng)典的細(xì)胞計數(shù)常用到血細(xì)胞計數(shù)板。細(xì)胞消化成單個細(xì)胞后，將細(xì)胞懸液加入血蓋片和計數(shù)板之間的空隙中，通常我們計數(shù)計數(shù)板的四角大方格(每個大方格又分16個小方格)內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。計完數(shù)后，需換算出每ml懸液中的細(xì)胞數(shù)。由于計...

原代細(xì)胞或可調(diào)節(jié)血管口徑和通透性

原代細(xì)胞在酶的作用下，由它再進(jìn)一步生成一組旁分泌激素物質(zhì)，如血栓素和前列腺素等，這類物質(zhì)對調(diào)節(jié)血管口徑和通透性有明顯的作用，還能引起炎癥反應(yīng)和疼痛，并影響血液凝固。中性粒細(xì)胞內(nèi)含許多彌散分布的細(xì)小的淺紅或淺紫色的*顆粒，顆粒中含有髓過氧化物酶、酸性磷酸酶、吞噬素、溶菌酶等。髓過氧化物酶是中性粒細(xì)胞所*，即使在有強吞噬作用的巨噬細(xì)胞中也極少或*沒有這種酶。在細(xì)胞化學(xué)上，一般將這種髓過氧化物酶作為中性粒細(xì)胞的標(biāo)志。中性粒細(xì)胞具有很強的趨化作用。所謂趨化作用，就是細(xì)胞向著某一化學(xué)物...

原代細(xì)胞活力評估難度低

傳統(tǒng)的原代細(xì)胞培養(yǎng)主要是通過顯微鏡下形態(tài)學(xué)變化以及傳代培養(yǎng)周期的變化預(yù)估細(xì)胞生長生存狀態(tài)。這種主觀判斷既無法量化，也無法進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。因此，目前對細(xì)胞存活質(zhì)量的判斷并沒有準(zhǔn)確、客觀的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，并且對體外培養(yǎng)細(xì)胞的存活質(zhì)量控制往往被科研工作者們“忽略”，從而導(dǎo)致實驗結(jié)果的不穩(wěn)定。體外細(xì)胞的有效培養(yǎng)新概念——“細(xì)胞質(zhì)控”。通過細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖及DNA損傷五方面對細(xì)胞生長生存狀態(tài)進(jìn)行的監(jiān)控。在這五個方面中，影響zui大的便是細(xì)胞活力，下面咱們專門來談一談細(xì)胞...

細(xì)胞株為何不貼壁？

總結(jié)細(xì)胞株不貼壁可能原因如下：●胰蛋白酶消化過度●支原體污染●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）●細(xì)胞老化●接種細(xì)胞起始濃度太低或太高解決方法：●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物●使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2●細(xì)胞株啟用新的保種細(xì)胞●調(diào)節(jié)*接種細(xì)胞濃度150mgPygeumExtract94279-95-5水楊梅提取物標(biāo)準(zhǔn)品150mgPheniramineMaleate132-20-...

原代細(xì)胞實驗中淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的實驗

原代細(xì)胞實驗中正常機體的T淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中受到特異性抗原或有絲分裂原刺激。可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞。細(xì)胞免疫缺陷時，患惡性腫瘤或某些其他疾病時。轉(zhuǎn)化率顯然降低。目前zui常用植物血凝素（PHA）作為分裂原來檢測受試者的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，從而判定其細(xì)胞免疫功能，稱為PHA刺激淋巴細(xì)胞實驗的轉(zhuǎn)化實驗。實驗材料肝素試劑、試劑盒199培養(yǎng)液小牛血清鏈霉素青霉素PHA儀器、耗材注射器針頭試管吸管離心機實驗步驟1.采肝素抗凝血1~2毫升（1毫升血中加肝素20單位）充分混勻。37℃靜置1~...

細(xì)胞株凍存技術(shù)綜述

細(xì)胞株實驗室低溫保存設(shè)備包括：液氮保存箱、液氮罐、-140℃/-150℃深冷低溫保存箱、-86℃超低溫冰箱、程控降溫儀、低溫冰箱（-20℃、-30℃、-40℃）、藥品保存箱、疫苗保存箱、血庫冰箱、層析柜、防爆冰箱、防火冰箱等。檢驗冰箱可靠性和制冷能力的方法：1、常規(guī)冰箱放置溫度計；2、超低溫冰箱放置加熱器、大量樣品或反復(fù)開門凍存保護劑很多化合物都可以作為凍存保護劑，它們既可以單獨使用也可以聯(lián)合使用，例如糖、血清和去污劑。雖然凍存沒有的準(zhǔn)則，但是大家普遍認(rèn)為二甲基亞砜（DMSO...

原代細(xì)胞培養(yǎng)及外源基因?qū)氲脑砗筒僮鞑襟E

原代細(xì)胞實驗試劑1.細(xì)胞營養(yǎng)液（DMEM液體培養(yǎng)基，10％胎牛血清，雙抗100單位/ml），消化液（0.05％胰酶，0.53mMEDTA·Na），Hank’s液。2.2×HBS液（280mMNaCl,10mMKCl,1.5mMNaHPO4·2H2O,12mM葡萄糖，50mMHepes，pH7.05,0.2μ過濾除菌），CaCl2（2.5M，0.2μ過濾除菌）溶液，超純水（滅菌）。3.PBS，蛋白酶K，NP40，RNaseA，無水乙醇，酚，DNA上樣緩沖液，瓊脂糖，TAE電泳緩...

原代細(xì)胞進(jìn)行重組的方法

原代細(xì)胞成人非肌肉組織（比如皮膚或血液）的iPS細(xì)胞進(jìn)行重組，使其退回到原始狀態(tài)，然后加入大量Pax7分子，向細(xì)胞發(fā)送信號，讓其開始變成肌肉。隨著細(xì)胞不斷增多，它們變得非常類似成人肌肉干細(xì)胞。隨后，研究人員停止供應(yīng)Pax7信號分子，并為這些細(xì)胞提供支持和營養(yǎng)，讓其*發(fā)育成熟。結(jié)果表明，經(jīng)過2周到4周的三維培養(yǎng)，得到的肌肉細(xì)胞會形成能像人體肌肉組織一樣收縮并對外部刺激作出反應(yīng)的肌肉纖維。當(dāng)植入成年老鼠體內(nèi)，這些肌肉纖維能存活且運作至少3周，并通過血管化過程，與老鼠自身組織融合到...