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原代細胞如何消除組織培養(yǎng)的污染

原代細胞當重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。①在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞，稀釋到常規(guī)原代細胞傳代的濃度。...

哪些方法可以使細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基

1．細胞株直接適應(yīng)法式—將細胞直接從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基中。2．連續(xù)適應(yīng)或循序隔絕法—分幾步將細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基中。與直接適應(yīng)法相比較，連續(xù)適應(yīng)法對于細胞更溫和些。為了使細胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基，關(guān)鍵是細胞培養(yǎng)應(yīng)滿足以下條件：1．處于對數(shù)生長中期2．存活率大于90%3．在適應(yīng)期間，以較高的初始細胞株接種量進行接種下面列出了常規(guī)適應(yīng)步驟。初始細胞接種量、細胞產(chǎn)量和培養(yǎng)周期是連續(xù)優(yōu)化的良好開端。直接適應(yīng)有些類型的細胞可以直接從含有血清培養(yǎng)基適應(yīng)無血...

干細胞過濾器的產(chǎn)品優(yōu)勢

干細胞過濾器是一種用于細胞過濾和分離的微流體器件。本產(chǎn)品由一個封閉的流體通道作為細胞過濾器腔體，1、在細胞過濾器腔體的兩端設(shè)有流體的輸入端口；2、和流體輸出端口；3、在流體的輸入端口和流體輸出端口之間設(shè)置細胞過濾裝置即細胞顆粒阻擋器；4、在細胞顆粒阻擋器旁為流體池；5、細胞阻擋結(jié)構(gòu)可阻擋流體中較大的細胞，并使之聚集在流體池中，并被流體池中的相關(guān)抗體所捕獲。通過外加的物理或化學(xué)作用，使其破碎或滅活，達到細胞過濾的作用。干細胞產(chǎn)品說明：尼龍網(wǎng)格大小為40微米、70微米以及100微...

不同細胞培養(yǎng)基的除菌方式及注意事項

細胞系培養(yǎng)基滅菌的方式分為高壓滅菌和膜過濾除菌，不同的培養(yǎng)基由于其營養(yǎng)成份不同，滅菌方式也可能不同。絕大多數(shù)細胞培養(yǎng)基不適宜高壓滅菌。因為高壓滅菌易破壞細胞培養(yǎng)基中的一些成份，如某些維生素等，因此，在通常的高壓滅菌型細胞培養(yǎng)基中，配方中的維生素種類與過濾型培養(yǎng)基相比較少，對于細胞系生長*的谷氨酰胺等，需待高壓后補充到培養(yǎng)基中。在高壓過程中，滅菌用器皿的選擇應(yīng)注意避免蒸發(fā)或是污染。在大規(guī)模工業(yè)化中，可以采用短時超高溫處理的方法進行流水線式的滅菌，能夠提高自動化效率，降低成本。膜...

人外周T細胞的分離與鑒定

材料：淋巴細胞株懸液、1%SRBC懸液、滅活之小牛血清、離心管、試管、吸管、載玻片、0.8%戊二醛、瑞氏染液。方法（1）取上述配好之淋巴細胞懸液0.1ml于潔凈小試管中，加入1%SRBC懸液0.1ml。再加入小牛血清0.1ml，混勻，置37℃水浴箱中5分鐘，500轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，放4℃冰箱2-24小時。（2）從冰箱中取出試管，留適量上清液，輕輕搖勻，加0.8%戊二醛2滴，輕搖后，置4℃冰箱15分鐘，取出，作成涂片，待自然干燥，以瑞氏染液染色。（3）計數(shù)：鏡下觀察，凡結(jié)合三...

原代細胞培養(yǎng)實驗器具清洗步驟

原代細胞實驗器具清洗l玻璃類1、主要有：培養(yǎng)瓶，血清瓶，小青瓶，移液管，離心管，試管，培養(yǎng)皿等。2、清洗步驟：泡在含有洗潔凈的自來水中→撈出來用毛刷將實驗器具各個面刷洗至少25遍→自來水沖洗25遍→過一遍一蒸水→泡入鉻酸,過夜(24h左右)→從鉻酸中撈出器具，自來水沖洗25遍→過三遍一蒸水，三遍三蒸水→烘箱內(nèi)烘干→收入柜子備用→用前高溫滅菌(121℃，25min)→烘干→使用。注意：新的玻璃器具先要泡鹽酸1天，然后清洗步驟與上面相同。l塑料類1塑料類器具主要包括：孔板，大槍頭...

影響哺乳動物細胞復(fù)蘇的因素

影響哺乳動物原代細胞復(fù)蘇的因素包括：（a）細胞類型，（b）生長階段，（c）細胞處于細胞周期的哪個階段，（d）終懸液中的細胞數(shù)量和濃度。可通過優(yōu)化以上因素來提高復(fù)蘇細胞活力，另外，還需考慮凍存保護劑的特性以及凍存過程的具體操作。哺乳動物細胞培養(yǎng)對其他細胞和微生物的污染特別敏感，例如Hela細胞。由于這種特性，初始細胞系可通過同工酶分析、染色體組型分析、免疫分析或基因組分析，檢測來源。凍存前后均應(yīng)該進行如上檢測。特別需要注意的是，病毒和支原體污染。一套完整健全的哺乳動物細胞系鑒定...

神經(jīng)細胞分散培養(yǎng)

（一）細胞系選材常用胚胎動物或新生鼠神經(jīng)組織。雞胚常用胚齡6-8d，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎。不過也有認為與組織相關(guān)。如大白鼠胚胎以19d為宜，小鼠以18d為宜，大鼠紋狀體以10d為宜；若紋狀體與黑質(zhì)聯(lián)合培養(yǎng)的大鼠胚，則黑質(zhì)以13d，紋狀體18-21d為宜；小腦以20-21d小鼠胚胎，所獲蒲氏細胞成活率高，顆粒細胞正在分化；脊髓與DRG聯(lián)合培養(yǎng)，常用4-7d雞胚或12-14d小鼠胚胎，取材易，神經(jīng)成活率高。（二）取材。腦則取出相應(yīng)組織，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消...