細(xì)胞簡介：

產(chǎn)品名稱 小鼠外周血白細(xì)胞

簡稱 PBL;PWBC

組織來源 外周血

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡介 小鼠外周血白細(xì)胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十世紀(jì)初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這新概念。白細(xì)胞（Leukocyte），舊稱白血球，血液中的類細(xì)胞。根據(jù)白細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有無特殊顆粒，可將其分為有粒白細(xì)胞和無粒白細(xì)胞。前者常簡稱為粒細(xì)胞，根據(jù)其特殊顆粒的染色特性，又分為中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞，白細(xì)胞也通常被稱為免疫細(xì)胞。在顯微鏡下可以看到，血細(xì)胞中體積比較大、數(shù)量比較少，具有細(xì)胞核；其主要作用是吞噬細(xì)菌、防御疾病。

方法簡介 實驗室分離的小鼠外周血白細(xì)胞采用取外周血、通過密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實驗室分離的小鼠外周血白細(xì)胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 小鼠外周血白細(xì)胞 培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 懸浮

細(xì)胞形態(tài)： 圓形

傳代比例： 不傳代

傳代特性： 不增殖；不傳代

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對數(shù)生長期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實驗步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測細(xì)胞電特性（如鈉電流）。