商品屬性：

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞

簡稱 RGCs

組織來源 視網(wǎng)膜組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡介 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細(xì)胞組成，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層、視錐、視桿細(xì)胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、神經(jīng)纖層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的層薄膜，有感光作用；后部鼻側(cè)有視神經(jīng)乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個(gè)神經(jīng)元組成。神經(jīng)元是視細(xì)胞層，專司感光，它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上，而視錐細(xì)胞則在中心凹處多。第二層叫雙節(jié)細(xì)胞，約有10到數(shù)百個(gè)視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與個(gè)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系，負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細(xì)胞層，專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視神經(jīng)到達(dá)出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區(qū)，其分辨能力強(qiáng)。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞貼壁后呈單層排列，部分細(xì)胞聚集成團(tuán)，細(xì)胞呈圓形或橢圓形，核圓且相對透明，有些細(xì)胞膜上伸出短而小的突起；該細(xì)胞為高度分化細(xì)胞，在體外屬于不增殖群。視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞是青光眼病理性損害的主要細(xì)胞，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的死亡可導(dǎo)致視功能不可逆損傷，研究視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損害的細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)機(jī)制有利于青光眼發(fā)病機(jī)制的研究。

方法簡介 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法，結(jié)合視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)和化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、 多聚-L-賴溶液（1×）或多聚-L-賴溶液（10×） 、PBS 、培養(yǎng)基

包被條件： PLL（0.1 mg/mL）

培養(yǎng)基： 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代比例： 不傳代

傳代特性： 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液： 0.25%

原代細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

取材與預(yù)處理?：取新生24小時(shí)內(nèi)Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后重懸接種?。

?培養(yǎng)?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液?。

培養(yǎng)方法?：

原代細(xì)胞培養(yǎng)?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后接種于培養(yǎng)皿。

37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液。

?注意事項(xiàng)?：消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

?細(xì)胞系培養(yǎng)?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養(yǎng)基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養(yǎng)。

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