細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 小鼠腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞

組織來源 腎組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 小鼠腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腎臟；腎臟是小鼠的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水分及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性生素D3、前列腺素、激肽等，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌的降解場(chǎng)所和腎外的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎臟內(nèi)部的結(jié)構(gòu)，可分為腎實(shí)質(zhì)和腎盂兩部分。在腎縱切面可以看到，腎實(shí)質(zhì)分內(nèi)外兩層：外層為皮質(zhì)，內(nèi)層為髓質(zhì)。腎皮質(zhì)位于腎實(shí)質(zhì)表層，富含血管，新鮮時(shí)呈紅褐色，由百多萬個(gè)腎單位組成。每個(gè)腎單位由腎小體和腎小管所構(gòu)成，部分皮質(zhì)伸展至髓質(zhì)錐體間，成為腎柱。腎髓質(zhì)位于腎皮質(zhì)的深面，血管較少，色淡紅，為10-20個(gè)錐體所構(gòu)成。腎錐體在切面上呈三角形。錐體底部向腎凸面，向腎門，錐體主要組織為集合管，錐體稱腎乳頭，每個(gè)乳頭有10-20個(gè)乳頭管，向腎小盞漏斗部開口。在腎竇內(nèi)有腎小盞，為漏斗形的膜狀小管，圍繞腎乳頭。腎錐體與腎小盞相連接。每腎有7-8個(gè)腎小盞，相鄰2-3個(gè)腎小盞合成個(gè)腎大盞。每腎有2-3個(gè)腎大盞，腎大盞匯合成扁漏斗狀的腎盂。腎盂出腎門后逐漸縮窄變細(xì)，移行為輸尿管。腎單位是腎臟結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。腎小體包括腎小球和腎小囊。腎小體內(nèi)有個(gè)毛細(xì)血管團(tuán)，稱為腎小球，腎小球是個(gè)血管球。它由腎動(dòng)脈分支形成。腎小球外有腎小囊包繞。腎小囊分兩層，兩層之間有囊腔與腎小管的管腔相通。腎小管匯成集合管。若干集合管匯合成乳頭管，尿液由此流入腎小盞。微血管又稱毛細(xì)血管。分布于各種組織和細(xì)胞間的微細(xì)的血管。介于微動(dòng)脈和微靜脈之間。平均直徑7-9微米，數(shù)量極多，成網(wǎng)狀分布。管壁由層內(nèi)皮細(xì)胞及薄層基膜組成，厚約0.5微米。基膜外面有薄層結(jié)締組織，其中有纖細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和周細(xì)胞等。細(xì)的毛細(xì)血管由個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔，較粗的毛細(xì)血管由2-3個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成。分布于肌肉組織、神經(jīng)組織和結(jié)締組織中的毛細(xì)血管，內(nèi)皮細(xì)胞間為縫隙連接（縫隙寬150埃），稱連續(xù)毛細(xì)血管；分布于內(nèi)分泌腺、腎臟等處的毛細(xì)血管，除有縫隙連接外，細(xì)胞本身有許多小孔，（孔徑800-1000埃），稱有孔毛細(xì)血管；分布于肝、脾、骨髓及某些內(nèi)分泌腺的毛細(xì)血管，管腔擴(kuò)大，稱血竇。毛細(xì)血管的管壁薄、通透性大、管徑細(xì)（8-10微米）、數(shù)量多、血流速度慢，這些特點(diǎn)使其成為血液與組織液進(jìn)行物質(zhì)交換的場(chǎng)所，又稱交換血管。血竇（sinusoid）由毛細(xì)血管管腔擴(kuò)大而成，竇壁的般結(jié)構(gòu)與毛細(xì)血管壁相同，由單層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成，內(nèi)皮細(xì)胞膜上有窗孔。不同器官的竇壁結(jié)構(gòu)各有差別。脾血竇的內(nèi)皮細(xì)胞間有較寬裂隙；肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞是不連續(xù)的，有較寬的細(xì)胞隙（0.1-0.5微米）；肝、脾血竇的基膜不完整或無基膜，通透性比毛細(xì)血管大，較大的蛋白質(zhì)和血細(xì)胞可以通過。肝血竇壁內(nèi)有枯否細(xì)胞，脾血竇內(nèi)外有巨噬細(xì)胞，這兩種細(xì)胞都有吞噬能力，可吞噬清除血液中的異物、細(xì)菌等有害物質(zhì)，是機(jī)體單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的重要組成分。某些內(nèi)分泌腺的血竇有連續(xù)的基膜。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶消化，結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、多聚-L-賴溶液（1×）或多聚-L-賴溶液（10×）或明膠包被液（1 mg/mL） 、PBS 、培養(yǎng)基

包被條件： PLL（0.1 mg/mL）或明膠（0.1%）

培養(yǎng)基： 小鼠腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞 培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳2-3代

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。