商品屬性：

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱 兔椎間盤纖環(huán)細(xì)胞

組織來源 椎間盤組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡介 兔椎間盤纖環(huán)細(xì)胞分離自椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板、纖環(huán)、髓核組成的個(gè)密封體。上下有軟骨板，是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上，下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖環(huán)起將髓核密封起來。纖環(huán)由膠原纖束的纖軟骨構(gòu)成，位于髓核的四周。纖環(huán)的纖束相互斜行交叉重疊，使纖環(huán)成為堅(jiān)實(shí)的組織，能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負(fù)荷。纖環(huán)的前側(cè)及兩側(cè)較厚，而后側(cè)較薄。纖環(huán)的前部有強(qiáng)大的前縱韌帶，后側(cè)的后縱韌帶較窄、較薄。纖環(huán)細(xì)胞密度為9000個(gè)細(xì)胞/mm3，其外層的細(xì)胞呈梭型，主要屬于纖細(xì)胞，內(nèi)層細(xì)胞呈圓形，主要屬于軟骨細(xì)胞。在培養(yǎng)的情況下，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)，它們的核較圓，核仁較明顯。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)線粒體多，為橢圓形，有的可看到雙層單位膜，由單位膜包繞初級(jí)深酶體和次級(jí)深酶體。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復(fù)合體和分泌顆粒，纖環(huán)細(xì)胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖的能力很旺盛，保證纖環(huán)生理代謝活動(dòng)所需的構(gòu)造物質(zhì)的供給。但這種供給減少，纖環(huán)的生物性能就會(huì)減弱，椎間盤開始退變。

方法簡介 實(shí)驗(yàn)室分離的兔椎間盤纖環(huán)細(xì)胞采用膠原酶-聯(lián)合消化法并結(jié)合軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的兔椎間盤纖環(huán)細(xì)胞經(jīng)Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 兔椎間盤纖環(huán)細(xì)胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 梭形、多角形

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液： 0.25%

原代細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

取材與預(yù)處理?：取新生24小時(shí)內(nèi)Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后重懸接種?。

?培養(yǎng)?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液?。

培養(yǎng)方法?：

原代細(xì)胞培養(yǎng)?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后接種于培養(yǎng)皿。

37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液。

?注意事項(xiàng)?：消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

?細(xì)胞系培養(yǎng)?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養(yǎng)基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養(yǎng)。

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