細胞簡介：

產品名稱 兔關節囊成纖細胞

組織來源 關節囊組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 兔關節囊成纖細胞分離自關節囊組織；關節囊（articular capsule）是由結締組織構成的膜囊，附著于關節的周圍，密封關節腔。關節囊的壁共有兩層：外層為纖層；內層為滑膜層。纖層實際上是個連結骨的骨膜向另骨骨膜的移行。纖層厚而堅韌，由致密結締組織構成，含有豐富的血管和神經。其淺層纖多呈縱行排列；深層纖主要為環行纖。纖層的厚薄，各個關節不相同，即是在同關節中，各部也不致般在運動范圍小的或是負重較大的關節中，都較厚而緊張，相反，于運動靈活的關節，則較薄而松弛。有的關節囊的部分纖囊缺如，僅層滑膜層；有的部分明顯增厚，形成韌帶。滑膜層薄而柔潤，是由疏松結締組織構成，襯在纖層內面，周緣附著在關節軟骨的邊緣。它朝向關節腔的內面光而發亮，此面上蓋有層內皮細胞。滑膜向關節腔分泌滑液，滑液是稍粘稠而透明的液體，可減少關節中相連骨的摩擦，是種滑潤劑。滑膜表面可形成絨毛或皺襞突入關節腔內。有時滑膜層可以穿過纖層呈囊狀向外膨出，形成滑膜囊，常位于肌腱與骨面之間。有時滑膜層突出不明顯，僅呈深窩狀，稱為囊狀隱窩。成纖細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在定條件下，它可以實現跟纖細胞的互相轉化；成纖細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的成纖細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30 min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6 h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介 實驗室分離的兔關節囊成纖細胞采用混合酶消化結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的兔關節囊成纖細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養基

培養基： 兔關節囊成纖細胞培養基(基礎培養基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 成纖細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳3代左右

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

公司正在出售的產品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。