細胞簡介：

產品名稱 人肺小動脈內皮細胞

組織來源 肺小動脈組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 人肺小動脈內皮細胞分離自肺小動脈組織；肺動脈干是短而粗的動脈，自右心室的動脈圓錐起始，向左后上方斜升，先在升主動脈根部的前面，繼而至其左側，至主動脈弓的下方，約在第5胸椎高度，分為左、右肺動脈。左肺動脈較短，橫行向左，經左主支氣管前方至左肺門，分兩支進入左肺的上、下葉。右肺動脈較長，橫行向右，經主動脈升部和上腔靜脈的后方達右肺門，分3支進入右肺上、中、下葉。左、右肺動脈的各分支在肺實質內又反復分支，與支氣管的分支伴行，后達肺泡壁，形成稠密的毛細血管網。肺動脈輸送的是含二氧化碳較多的靜脈血。在肺動脈干分叉處稍左側與主動脈弓下緣之間有一結締組織索，稱動脈韌帶。管徑在0.3-1 mm之間，為小動脈（small-artery），小動脈包括粗細不等的幾級分支，也屬肌性動脈。較大的小動脈，內膜有明顯的內彈性膜，中膜有幾層平滑肌，外膜厚度與中膜相近，一般沒有外彈性膜。口徑在1mm以下的動脈，管壁有完整的平滑肌層及少量的彈性纖維和膠質纖維。小動脈是決定周圍循環阻力大小的主要因素，也是調節微循環灌注量的“總開關"。典型的小動脈，其管壁的厚度與管徑相比約為1：2。中膜的肌層相對比其他動脈為厚，當平滑肌在神經支配下強力收縮時，其管腔可以閉塞，而使血液不能流入它所分布的毛細血管內，從而增加了周圍血液循環的阻力。如果有許多小動脈同時收縮，可使血壓顯著上升。反之，當小動脈的平滑肌舒張時，則可使大量的血液流入毛細血管，外周阻力明顯下降，血壓降低。終末小動脈（terminal arteri-ole）的口徑為20-30 μm；后小動脈（metar-teriole），又稱毛細血管前小動脈（precapil-lary arteriole）的口徑為12-15 μm。管壁內均有較稀疏的平滑肌，在毛細血管前小動脈分支的起始部分，管壁平滑肌成分增厚，叫做毛細血管前括約肌（precapillary sphinc-ter），其收縮或舒張，可調節真毛細血管的血流量，是調節微循環灌注量的“分開關"。支配小動脈平滑肌的交感神經纖維，可延伸到終末小動脈和后小動脈的平滑肌細胞。在毛細血管前括約肌上交感神經纖維特別豐富。肺小動脈內皮細胞呈單層多角形鋪路石狀分布，該細胞在維持血管內外的動態平衡、合成和分泌細胞因子和介質、維持凝血和纖溶的動態平衡中起重要作用。

方法簡介 實驗室分離的人肺小動脈內皮細胞采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法、并通過內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的人肺小動脈內皮細胞經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑： 0.25%  、多聚-L-賴溶液（1×）或多聚-L-賴溶液（10×）或明膠包被液（1 mg/mL）  、PBS  、培養基

包被條件： PLL（0.1 mg/mL）或明膠（0.1%）

培養基： 人肺小動脈內皮細胞培養基(含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 內皮細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳2-3代

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

公司正在出售的產品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。