細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞

組織來(lái)源 腎上腺組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞分離自腎上腺組織；腎上腺是機(jī)體相當(dāng)重要的內(nèi)分泌器官，由于位于兩側(cè)腎臟的上方，故名腎上腺。腎上腺左右各一，位于腎的上方，共同為腎筋膜和脂肪組織所包裹。左腎上腺呈半月形，右腎上腺為三角形。從側(cè)面觀察，腺體分腎上腺皮質(zhì)和腎上腺髓質(zhì)兩部分，周圍部分是皮質(zhì)，內(nèi)部是髓質(zhì)。腎上腺內(nèi)部是髓質(zhì)部分，分泌腎上腺素。這些激素在應(yīng)激狀態(tài)釋放增多，能夠幫助升高血壓，加快心率，升高血糖，動(dòng)員全身的儲(chǔ)備物質(zhì)，為機(jī)體與外界環(huán)境的抗?fàn)幾骱贸浞譁?zhǔn)備。腎上腺外部是皮質(zhì)部分，分泌醛固酮、和少量的雌雄激素。醛固酮能夠促進(jìn)小便中尿鉀的排出和尿鈉的重吸收，正常數(shù)量的醛固酮，對(duì)維持機(jī)體正常血壓有重要作用。但是如果過(guò)多分泌，會(huì)導(dǎo)致高血壓和低血鉀。是機(jī)體必需的激素之一。當(dāng)機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，比如感冒，發(fā)燒，遇到突發(fā)事件的時(shí)候，腎上腺皮質(zhì)分泌大量的，這些能夠動(dòng)員機(jī)體的存儲(chǔ)能源，為應(yīng)對(duì)內(nèi)部或者外部重要事件提供充分的物質(zhì)準(zhǔn)備。當(dāng)缺乏時(shí)，機(jī)體在遇到重大事件的時(shí)候，往往缺乏足夠應(yīng)對(duì)能力，容易被病毒或外界壓力所擊倒。腎上腺產(chǎn)生的雄激素，對(duì)雄性來(lái)講，并非，但是對(duì)雌性而言，是雄激素的一個(gè)重要來(lái)源。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞經(jīng)3β-HSD免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑：0.25%、鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1mg/mL）、PBS、培養(yǎng)基

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：大鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞 培養(yǎng)基(含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代比例：1:2

傳代特性：可傳1-3代左右；2代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬(wàn)）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過(guò)Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過(guò)搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過(guò)磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過(guò)膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。