細(xì)胞簡介：

產(chǎn)品名稱 大鼠精原細(xì)胞

組織來源 睪丸組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡介 大鼠精原細(xì)胞分離自睪丸組織；睪丸呈微扁的卵圓形，表面光滑，覆蓋著鞘膜臟層；深部是質(zhì)地堅韌的白膜，在睪丸后緣增厚并進(jìn)入睪丸，形成睪丸縱膈，縱膈發(fā)出許多睪丸小隔深入睪丸實質(zhì)，將實質(zhì)分為睪丸小葉，數(shù)量約為100-200。每個小葉內(nèi)約有2-4條生精小管，具有產(chǎn)生精子的作用；生精小管之間的結(jié)締組織中有睪丸間質(zhì)細(xì)胞，具有產(chǎn)生雄激素的作用。生精小管首先匯合成為精直小管（也稱直精小管），精直小管進(jìn)入睪丸縱膈形成睪丸網(wǎng)，之后睪丸網(wǎng)發(fā)出12-15條輸出小管通過睪丸后上緣進(jìn)入附睪。生精小管的生精上皮是精子產(chǎn)生的地方，由生精細(xì)胞和支持細(xì)胞構(gòu)成，成人的生精小管有30-70 cm長。精子的產(chǎn)生過程包括生精細(xì)胞的分化、支持細(xì)胞的作用、雄激素的調(diào)節(jié)等。生精細(xì)胞并不是一種細(xì)胞，它是多種細(xì)胞的統(tǒng)稱，包括精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、次級精母細(xì)胞、精子細(xì)胞、精子。前者依次發(fā)育分化為后者，且依次從生精上皮的基部到管腔面排列，終形成精子進(jìn)入到管腔之中，并借助生精上皮外側(cè)的肌樣細(xì)胞的收縮作用向下一級管腔移動。精原細(xì)胞是指由睪丸精子管上皮的原始生殖細(xì)胞經(jīng)過多次有絲分裂而形成的細(xì)胞。原始的胚細(xì)胞經(jīng)分化形成精原細(xì)胞，精原細(xì)胞經(jīng)復(fù)制形成初級精母細(xì)胞，初級精母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)第一次分裂后形成次級精母細(xì)胞，再經(jīng)過減數(shù)第二次分裂形成精細(xì)胞。精細(xì)胞經(jīng)過變形終形成精子。精原細(xì)胞屬于雄性生殖細(xì)胞的早期發(fā)育階段，能不斷地進(jìn)行有絲分裂，增加細(xì)胞數(shù)量，并分化為精母細(xì)胞。精原細(xì)胞貼近基膜，細(xì)胞呈圓形，核大而圓，梁色深。精原細(xì)胞在男性的一生中具有幾乎無限分裂的能力，而且分裂過程中能夠保持原有的基因性狀不變。在增殖過程中，通過精原細(xì)胞的分裂和分化，由精原細(xì)胞產(chǎn)生精母細(xì)胞，進(jìn)入成熟分裂，因而通過增殖可大大增加精母細(xì)胞的數(shù)量。按理論推算，一個精原細(xì)胞通過數(shù)次細(xì)胞分裂，可形成上百個初級精母細(xì)胞。但在生精過程早期，生精細(xì)胞很易發(fā)生變性，故實際上少于這個數(shù)字。在精原細(xì)胞的增殖過程中，有一部分Ad型精原細(xì)胞不再繼續(xù)分裂，而是保留下來，成為新的精原干細(xì)胞，因此通過增殖不僅能使精原干細(xì)胞不斷得到更新，且能使精原干細(xì)胞保持一定數(shù)量，從而使精子的產(chǎn)生持續(xù)地進(jìn)行下去，不會枯竭。

方法簡介 實驗室分離的大鼠精原細(xì)胞采用混合酶多步消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實驗室分離的大鼠精原細(xì)胞經(jīng)AP（堿性磷酸酶）免疫組化染色鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑：0.25%、PBS、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基：大鼠精原細(xì)胞培養(yǎng)基(含FBS、生長添加劑、GDNF、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：圓形、橢圓形

傳代比例：1:2

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對數(shù)生長期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實驗步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測細(xì)胞電特性（如鈉電流）。