PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

【產(chǎn)品名稱(chēng)】淋病奈瑟菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
【英文名稱(chēng)】Neisseria gonorrhoeae
【產(chǎn)品編號(hào)】YSP6997
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測(cè)，所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀，可通過(guò)實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線(xiàn)判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR（Taqman探針?lè)ǎ?duì)鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測(cè)。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增β-actin基因，與同類(lèi)產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號(hào)更強(qiáng)，擴(kuò)增效率更高。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
淋病奈瑟菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
實(shí)驗(yàn)步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
98%25g5g()二槲皮素106956matrix metalloproteinase 7

 氨培養(yǎng)基 規(guī)格： 100g 用途： 用于鑒別細(xì)菌利用銨鹽作為源并分解葡萄糖的試驗(yàn)。

白介素21(IL21)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 TMUB2 蛋白 (His 標(biāo)簽)*250(g)

人PSelectincABL1/2(Tyr393/429)  化非受體酪氨激酶cAbl抗體規(guī)格:96T/48T規(guī)格:200mgDeltalike ligand4檢測(cè)試盒20mg人黑素瘤細(xì)胞，WM2664細(xì)胞1x10^6cells

98%5g25g刻葉紫堇127184matrix metalloproteinase 3

芹糖甘草苷；甘草苷元-7-O-D-芹糖-4’-O-D-葡萄糖苷 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 Liquiritin apioside

補(bǔ)體因子B(CFB)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 SUSD4 / Sushi domain-containing protein 4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)*250(g)

人肽盤(pán)生長(zhǎng)子(PLGF)NFκB p105/p50(PhosphoSer373)  化細(xì)胞核子p50/k基結(jié)合核子抗體規(guī)格:96T/48T規(guī)格:100mgDickkopf 1檢測(cè)試盒20mg人橫紋肌瘤細(xì)胞，A673細(xì)胞1x10^6cells

98%500g25gγ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)檢測(cè)試劑盒(重氮比色法)Thrombospondin type1 domaincontaining 7A antibody

 胰月示-亞鹽-環(huán)絲氨瓊脂基礎(chǔ)(TSC) 規(guī)格： 100g 用途： 用于食品和臨床樣本中產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離培養(yǎng)和計(jì)數(shù)(SN0177-92，ISO標(biāo)準(zhǔn))。

Recomb Protein G  重組蛋白G進(jìn)口、原裝NaKATP酶檢測(cè)試盒25gHuman/人Elisa試盒4876102

98%5g100gγ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)檢測(cè)試劑盒(重氮比色法)phospholipase C δ1

吲哚(standard for GC,>99.5%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,>99.5%(GC) Indole

GSTTag protein  重組谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶現(xiàn)貨供應(yīng)抗酒石性酶5檢測(cè)試盒25gHuman/人Elisa試盒4876102

≥99%25g5gγ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)檢測(cè)試劑盒(重氮微板法)phospholipase C

去氫延胡索甲素硝鹽 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún) 大鼠頜下腺上細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

Cholesterol  膽固醇*TRAP5檢測(cè)試盒5gHuman/人Elisa試盒487683
淋病奈瑟菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒丹皮新苷 CAS號(hào)： 100291869 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

4βD葡萄糖1,3,7三羥 CAS號(hào)： 81991993 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

7O杧果苷 CAS號(hào)： 31002127 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

北美芹素 CAS號(hào)： 13161756 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

丹皮原苷 CAS號(hào)： 72520924 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

管花苷A CAS號(hào)： 112516059 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

鬧羊花毒素V CAS號(hào)： 37720868 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

鬧羊花毒素III CAS號(hào)： 26342665 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

鬧羊花毒素ＩＩ CAS號(hào)： 26116892 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

11O異酰12O酰通關(guān) CAS號(hào)： 1260252183 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

D核糖? CAS號(hào)： 50691 規(guī)格： HPLC≥98%;100mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

竹紅菌素 CAS號(hào)： 137592268 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

原偽金絲桃素 CAS號(hào)： 54328095 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

愈創(chuàng)甘油 CAS號(hào)： 93141 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)

異鼠李素 3O半乳糖苷 CAS號(hào)： 6743926 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)