產品名稱：惡性黑色素瘤細胞;A-375

規格：1×10?cells/T25培養瓶
貨號：YS-02X9523

細胞生長實驗 ：細胞生長良好，形態正常

儲存條件：2℃-8℃，避光儲存

運輸條件：冰袋冷藏運輸
公司產品僅用于科研

細胞特性：

1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。

2)細胞鑒定：細胞免疫熒光染色為陽性。

3)經鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5)細胞生長方式：上皮樣，不規則細胞，貼壁培養。

細胞培養步驟

一．培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640 培養基；優質胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061），1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070），1%；雙抗，1%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

注意事項：

（1）凍存前細胞狀態，細胞最好在對數生長期，細胞密度適合，剛剛發生細胞融合，過密或連成片的細胞狀態不好，而且消化時不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數量級比較好，我凍存的細胞一般T25培養瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養皿（大概10的8次方個細胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格，我從10%-90%都用過，問題不大，個人認為10%-20%可以了，能節約處就節約點嘛！另外，凍存液可以在處理細胞前配置，放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關于“慢凍"，傳統的方法，LLC細胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數量多的實驗室，推薦使用程序降溫盒，內裝異丙醇，在-80度并內可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。

ER- Alpha(phospho-Tyr537)/FITC 熒光素標記抗大、小鼠磷酸化雌受體α抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml

Rabbit  dog IgG/Gold 金標記兔抗狗IgG (10nm/15nm)Multi-class antibodies規格： 2ml

成纖維細胞生長因子-10/纖維母細胞生長因子-10抗體  FGF-10 0.2ml

Goat  Guinea pig IgG/Cy3 Cy3標記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

FOXI1 英文名稱： 叉頭蛋白I1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Stathmin(Ser38) 磷酸化原癌基因蛋白18抗體 規格 0.1ml

Rabbit  dog IgG/Gold 金標記兔抗狗IgG (10nm/15nm)Multi-class antibodies規格： 2ml

LYVE-1(lymphalic vessel endotheilial hyaluronan receptor 1) 管內皮透明質酸受體抗原Multi-class antibodies規格： 0.5mg

 Alkaline phosphatase/PLAP 堿性磷酸酶抗體Multi-class antibodies規格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-c-Abl(Ser735) 磷酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體 規格 0.1ml

蛋白酶K濃縮液(20X) 1ml 400ug/ml pH 8.0

VAP1 英文名稱： 血管粘附蛋白1抗體 0.1ml

phospho-DAG1 (Tyr892) 英文名稱： 磷酸化肌相關蛋白DAG1抗體 0.1ml

 Alkaline phosphatase/PLAP 堿性磷酸酶抗體Multi-class antibodies規格： 0.1ml

Streptokinase 英文名稱： 鏈激酶抗體 0.1ml

eIF3K 英文名稱： 真核翻譯起始因子3K抗體 0.2ml

受體相關蛋白16抗體  TRA16 0.2ml

 TRA16/FITC 熒光素標記受體相關蛋白16抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-ITGB4(Tyr1526) 磷酸化整合素β4抗體 規格 0.1ml

PR (Progestogerone receptor) 孕受體(抗原)Multi-class antibodies規格： 0.5mg
惡性黑色素瘤細胞;A-375DBD-NCS [=4-(N,N-二甲基氨磺酰)-7-異硫酸基-2,1,3-苯并惡二唑]重樓皂苷 Ⅶ植物V型ATP酶（V type ATPase ）活性比色法定量檢測試劑盒

氯甲酸-9-芴甲酯(>97.0%(HPLC)(T))總銀杏酸（套）動物線粒體F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒

鄰苯二甲(>99.0%(GC))黃芩素動物組織線粒體F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒

2-氨基吡啶(>99.0%(GC)(T))胡黃連苷-Ⅱ植物葉綠體F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒

2-氨基苯硫酚(>95.0%(T))雷公藤酯甲F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒

丹磺酰肼(>95.0%(HPLC)(T))脫水穿心蓮內酯琥珀酸半酯酵母F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒

DBD-H [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-肼基-2,1,3-苯并惡二唑(>98.0%(HPLC))丹參酮ⅡA磺酸鈉A型ATP酶（A type ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒

NBD-H (=4-肼基-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑肼)(>98.0%(HPLC))芒果苷動物總ATP酶（total ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒

使用步驟：

一）準確稱量試劑：根據不同的菌類和用途，選擇適宜的培養基，培養基所需試劑必須純凈。

（二）校正pH值：將稱量好的培養基各種成分放入容器內，標記劃線，加熱溶解，補充水分，測定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調節pH值到適宜范圍內。

（三）過濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用人子宮成纖維細胞*培養基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養基倒入其中過濾至透明。

（四）分裝：將過濾后的培養基分裝于中試管或三角瓶內（試管內每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準備滅菌。

（五）滅菌：培養基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養細胞在水中煮沸后即被殺死，但細菌的芽胞有較強的抗熱性，須經高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質易于凝固變性，因為蒸汽的穿透力強，殺菌效果好。