蛋白表達及純化：

1.培養500ml哺乳動物細胞，然后將重組質粒轉染到細胞中，通過瞬時表達產生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
公司產品僅供科研使用，不得用于臨床！

商品介紹：

相關產品：

Recombinant Human PIN1宿主: E.Coli標簽: N-terminal His Tag規格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

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操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉移至新的預冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

Ⅱ 培養細胞蛋白提取

1． 貼壁培養的細胞，吸去培養基后，加入10mL/150mm培養板的冷PBS洗兩次，每次振搖數次以盡量去除培養液；

2． 懸浮培養的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養液移至離心管中， 1000轉/分離心10 min，再用10mL/150mm培養板的冷PBS，1000轉/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉至新的預冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

注意事項：

1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同，應當根據細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調整固定時間。

2、雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時間過久會導致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構象出現空間障礙。分子間交聯形成的網格結構可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結果。因此，4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進行修復，然后才能進行免疫染色等后續操作。

4、本產品對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內。

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作 
phospho-Cyclin C (Ser275)產品名稱: 周期suC抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Cow, Horse, Sheep

BDNF產品名稱: 腦源神經營養因子抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, GuineaPig

Caspase-6產品名稱: 半胱胺suan蛋白mei蛋白-6前體蛋白抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat

Inversin產品名稱: 內臟器官發育轉位相關蛋白NPH2抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Cow, Sheep, Chimpanzee

Semaphorin 3E產品名稱: 軸突導向因子SEMA3E抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep

ASC產品名稱: 凋亡相關斑點樣蛋白ASC抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

應用類型: Phosphorylated / Other英文名稱: Sodium Potassium ATPase(Loading Control)英文別名: ATP1A1;

CYP11A1產品名稱: 細胞色suP450 11A1重組鼠單克隆抗體交叉反應: Human, Mouse, Rat

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phospho-GFAP (Ser38)產品名稱: 膠質纖維suan性蛋白抗體交叉反應: Human, Mouse   

過氧化還原酶1(PRDX1)重組蛋白人c-myc癌基因產物(c-myc)ELISA試劑盒c-mycc-myc癌基因產物elisamei聯免疫試劑盒Human c-myc Oncogene product,c-myc ELISA Kit

人c-Jun氨基末端激mei/應急激活的蛋白mei(JNK/SAPK)ELISA試劑盒JNK/SAPKc-Jun氨基末端激mei/應急激活的蛋白meielisa檢測試劑盒Human JUN MAPK ELISA Kit

人CDCP1(CDCP1)ELISA試劑盒CDCP1CDCP1elisa kitHuman CDCP1 ELISA kit

人CD82分子(CD82)ELISA試劑盒CD82CD82分子ELISA試劑盒Human CD82 ELISA Kit

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