【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失，請仔細(xì)閱讀購買說明！

產(chǎn)品名稱：吲哚乙酸氧化酶活性檢測試劑盒

規(guī)格：50管/48樣、100管/96樣

測試方法：微量法、可見分光光度法

貨號：YS-01S6698

測定意義：

吲哚乙酸（IAA）在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破壞失去活性。植物體內(nèi)吲哚乙酸氧化酶活力的大小，對調(diào)節(jié)體內(nèi)吲哚乙酸的水平，起著重要的作用，而影響植物的生長。

測定原理：

在無機(jī)酸存在情況下，吲哚乙酸能與FeCl3作用，生成紅色螯合物，該物質(zhì)在530nm處有最大吸收峰，酶活力的大小可以其破壞吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法測定。

自備儀器和用品：

低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計、1.5mL離心管、1mL玻璃比色皿、和蒸餾水。

樣品制備：

1）直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品，體積可達(dá)2.000ml。

2）過濾混濁溶液。

3）除去樣品中的CO2 。

4 ）加氫氧化鉀或*將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。

5 ）調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。

6 ）用空白樣品做對照測定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）。

7 ）用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。

8 ）壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。

9 ）用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。

10）含脂肪的樣品用熱水提取。

吲哚乙酸氧化酶活性檢測試劑盒特點：

(1)應(yīng)用廣泛

由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收，因此均可借此法加以測定。到目前為止，幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。

(2)靈敏度高

由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展，使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展，從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究，使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言，光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致是比較高的。不但在實際工作中光度法被廣泛采用，在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中，它更受重視，很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測定，如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定，已有比較滿意的方法了。

(4)準(zhǔn)確度高

對于一般的分光光度法來說，其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi)，如采用示差分光度法測量，則誤差往往可減少到千分之幾。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。

(6)分析成本低、操作簡便、快速。

操作步驟：

實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37℃反應(yīng)60分鐘。

溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。