腫瘤細胞在培養過程中如果環境不適合其生長就會出現部分細胞的老化現象。這是干細胞培養的一個難點也是經常出現的問題。本文描述干細胞老化時出現的跡象，以及其預防措施。
干細胞老化的表現
★ 細胞胞漿內特別是在核區附近出現黑色顆粒，表示細胞開始出現老化；
★細胞胞漿內出現空泡，則表明該細胞已老化或者已經開始分化（在全部細胞中出現少數老化細胞是正常的）；
★ 細胞立體感逐漸消失，細胞間的間隔不清，部分細胞扁平狀，細胞的形狀趨向多樣；
★ 貼壁性減退，出現一些漂浮的細胞；部分分泌強的細胞分泌物增多，細胞表面會比較臟；
★ 細胞增殖速度明顯下降，分裂相的細胞明顯減少。
干細胞老化的原因和預防
1) 接種密度的影響：部分干細胞具有一定的分泌性能，能夠分泌一些對細胞有支持能力的因子類物質；所以必須維持一定的接種密度，否則會導致腫瘤細胞增殖減慢，zui后出現老化；
2) 消化過度：消化細胞時會對細胞的表面蛋白有較強的損傷，所以消化的時間不能過長，使用合適濃度和pH 值的消化酶，否則會導致細胞老化和分化；
3) 合適的密度的時候就要傳代：細胞如果過密，接觸抑制作用會導致細胞的活力減弱并影響增殖導致老化；
4) 使用合適的血清和培養基：不同的干細胞對培養基特別是血清的要求不同，所以使用不同的培養用的血清進行篩選，尋找該干細胞培養的血清是預防細胞老化，維持腫瘤細胞正常生長的重要保證。