相較于一些復(fù)雜的分析方法,
分光光度檢測試劑盒的使用相對簡單,易于操作。只要按照說明書配制好試劑、設(shè)置好參數(shù),就可以較快地完成樣品的測試,大大提高了工作效率,特別適合批量樣品的分析。分光光度檢測試劑盒比較便宜且容易獲得,這使得該方法在大規(guī)模的常規(guī)檢測中具有明顯的經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢,可廣泛應(yīng)用于化工、冶金、地質(zhì)、醫(yī)學(xué)、食品、制藥等多個部門以及環(huán)境監(jiān)測系統(tǒng)。
分光光度檢測試劑盒原理:
1.選擇吸收:許多物質(zhì)的溶液具有顏色,這是由于溶液中的物質(zhì)對光的選擇性吸收造成的。不同的物質(zhì)因分子結(jié)構(gòu)差異,對不同波長光的吸收能力各異,從而擁有特有的吸收光譜。即使是同一種物質(zhì),含量不同時對光的吸收程度也會有所不同。
2.定量依據(jù):基于朗伯-比爾定律,當(dāng)一束平行單色光垂直照射通過均勻、非散射體系的樣品溶液時,若吸光質(zhì)點(diǎn)之間無相互作用,且入射光與物質(zhì)間僅發(fā)生光吸收過程而無熒光和光化學(xué)現(xiàn)象,那么溶液對該單色光的吸收程度與溶液的濃度及光程長度成正比。儀器通過測定特定波長下樣品對光的吸光度,再依據(jù)該定律計算出樣品中目標(biāo)物質(zhì)的含量。
分光光度檢測試劑盒的測定步驟:
1.儀器準(zhǔn)備與預(yù)熱:打開分光光度計的電源開關(guān),讓儀器預(yù)熱一段時間,通常建議預(yù)熱30分鐘以上,以確保儀器穩(wěn)定性達(dá)到良好狀態(tài)。根據(jù)實驗要求調(diào)節(jié)合適的波長,比如某些情況下可能需要調(diào)節(jié)到490nm等特定波長,之后用蒸餾水進(jìn)行調(diào)零操作,使儀器的讀數(shù)基準(zhǔn)歸零。
2.樣本處理與反應(yīng)體系構(gòu)建:按照試劑盒說明書的要求對樣本進(jìn)行處理。例如,有的實驗需要吸取一定量的上清液,然后依次加入相應(yīng)的試劑,像先加試劑一和濃硫酸等,并充分混勻。之后可能需要將混合后的溶液置于特定溫度下進(jìn)行水浴加熱一定時間,如90°C水浴20min,再流水冷卻。
3.測量吸光值:將處理好的反應(yīng)液放入比色皿中,迅速將其放入分光光度計的光路中進(jìn)行測量。有些實驗可能在特定時間節(jié)點(diǎn)有多次測量要求,如先測定初始時刻的吸光值A(chǔ)1.然后在經(jīng)過一定時間的反應(yīng)后再次測定吸光值。
4.數(shù)據(jù)記錄與分析:準(zhǔn)確記錄每次測量得到的吸光度數(shù)值,并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線或相關(guān)公式計算出樣本中待測物質(zhì)的含量或濃度等參數(shù)。如果使用了標(biāo)準(zhǔn)品,也需要按照說明書對其進(jìn)行同樣的操作和測量,以便繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線用于后續(xù)樣本的定量分析。